In der Chemie, Biologie und Medizin ist eine Pipette ein typisches Laborinstrument, das zum Abgeben einer vorgegebenen Flüssigkeitsmenge verwendet wird, häufig als Medienspender. Der Erfolg Ihrer Pipettierergebnisse hängt davon ab, wie genau Sie das Pipettenvolumen bei der Durchführung heikler Studien ablesen. Die Verwendung präziser, hochwertiger Instrumente ist der beste Weg, um sicherzustellen, dass die Pipettenvolumina korrekt abgelesen werden. Da die Anforderungen an Genauigkeit und Präzision in Laboren immer weiter steigen, ist das Verständnis und die Perfektionierung idealer Pipettiertechniken von entscheidender Bedeutung.
Pipetten werden in der wissenschaftlichen Forschung verwendet und erfordern eine hohe Präzision, um kleine Flüssigkeitsmengen richtig zu messen und zu übertragen.
Allerdings können Gerätefehler oder Bedienerfehler die Ursache für Pipettenmessfehler sein. Jede Änderung des abgegebenen Volumens kann sich auf die Ergebnisse und die Reproduzierbarkeit von Experimenten wie denen der qPCR auswirken.
Faktoren, die die Pipettengenauigkeit beeinflussen:
Temperatur
Die Genauigkeit des Pipettierens wird stark von der Temperatur beeinflusst. Der Temperaturunterschied zwischen dem Fördergerät und der Flüssigkeit ist der einflussreichste Faktor. Die fallspezifischen Auswirkungen der Wärmeausdehnung treten im Luftspalt (Totluftvolumen) zwischen der Flüssigkeitsoberfläche und dem Kolben auf. Dies kann unter anderem dazu führen, dass die in die Spitze aufgenommene Flüssigkeitsmenge verringert oder erhöht wird.
Dichte
Die Menge der Flüssigkeit, die in die Spitze gesaugt wird, wird durch die Dichte (Masse/Volumen-Verhältnis) beeinflusst. Es wird Flüssigkeit mit geringerer Dichte angesaugt als bei einem ähnlichen Verfahren mit Wasser. Bei Flüssigkeiten mit geringerer Dichte sind die Ergebnisse entgegengesetzt. Dies wird durch das flexible Totluftvolumen und die Schwerkraft der Erde verursacht. Die Flüssigkeitsdichte ändert sich auch mit der Temperatur. Normalerweise ändert sich die Dichte einer Flüssigkeit auch mit der Temperatur. Bei 20 Grad/68 Grad F hat Wasser normalerweise eine Dichte von 0,998 kg/dm3, Ethanol hat eine Dichte von 0,79 kg/dm3 und Schwefelsäure (95-98 % h2SO4) hat eine Dichte von 1,84 kg/dm3.
Hoch
Die Genauigkeit wird durch den Luftdruck und die geografische Höhe beeinflusst. Je höher die Höhe, desto niedriger der Luftdruck und desto niedriger der Umrechnungsfaktor.
Darüber hinaus sinkt der Siedepunkt mancher Flüssigkeiten erheblich bis nahe an die Raumtemperatur, wodurch die Verdampfungsverluste stark zunehmen.
Reagenzverdampfung
Leichtflüchtige Reagenzien absorbieren Dampf, der in die Spitze eindringt und den Innendruck erhöht. Daher kommt es zu Fehlern, wenn Flüssigkeit aufgrund des erhöhten Drucks herausgedrückt wird.
Falscher Pipettiermodus ausgewählt
Beim Pipettieren treffen Bediener häufig zufällige oder subjektive Entscheidungen darüber, ob sie den Rückwärts- oder Vorwärtsmodus verwenden. Der Rückwärtsmodus sollte jedoch nur bei viskosen Proben verwendet werden. Im Rückwärtsmodus wird der Kolben vollständig (über den ersten Anschlag hinaus) gedrückt, um die Probe anzusaugen, und dann nur teilweise (bis zum ersten Anschlag) gedrückt, um die Probe abzugeben. Daher führt die Verwendung des Vorwärtsmodus bei viskosen Flüssigkeiten zu einer Unterabgabe, während die Verwendung des Rückwärtsmodus bei wässrigen Lösungen zu einer Überabgabe führt.
Neigungspipettieren
Probenverlust tritt auf, wenn die Pipettenspitze beim Ansaugen die Behälterwand berührt. Außerdem kann beim Pipettieren kleiner Volumina das schräge Herausziehen der Pipette aufgrund von Oberflächenspannungseffekten zu Volumenänderungen führen. Das direkte Herausziehen der Pipette aus dem Behälter reduziert Fehler.